24.11.20 졸업논문용 단백질 추출 & SDS-PAGE

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단백질 추출

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 졸업논문 작성을 위해서 교수님이 단백질 분석을 맡기시고 가셨다.

 

이번 졸업논문 주제는 7S ά subunit이 제거된 콩 선발이다.

 
 자엽의 색이 녹색인 2가지 계통을 주셔서 Full seed로 단백질 추출을 진행했다.

 

왼쪽은 control로 대원콩을 사용했다. 대원콩은 자엽의 색깔이 노란색이기 때문에 노란색이다.

 
 7S ά subunit은 SDS-PAGE로 분석하고,

단백질양이 많이 필요로 하기 때문에 총 1000 ㎕ (1ml) 추출을 하여 원심분리기를 돌렸다.

(사진은 안 찍어둬서 다른 걸로...)

 
 원심분리가 끝나면 0.6ml 마이크로 튜브에 400 ㎕ 정도 뽑아서 정량을 실시했다.

 

SDS-PAGE는 정량이 딱히 필요하지는 않지만, 논문 사진용으로 들어가는 거라

혹시 모르니 깔끔한 실험을 위해 정량을 실시했다.

 
정량은 총 단백질 20 ㎕ 가 들어가도록 설정을 했다.(15X = 1㎕당 단백질 15 µg 이 들어갔다는 뜻)
 

 

 

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SDS-PAGE

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 다음날 아침부터 SDS-PAGE를 실시했다.

 

잘 나와주면 실험을 더 안 해도 되고 깔끔하게 논문에 사용하면 된다.

 
 한 2시간 running 시키면 이렇게 대충 다 나온다.

 

하지만 논문용으로 쓰는 건 깔끔하게 분리가 되어야 하기 때문에 보통 6-7h 돌려줘야 한다.

 
 7시간 정도 돌린 모습이다.

 

확실하게 분리가 되었을 거라 보고 염색약을 넣고 젤을 염색시킨다.

 

 다음날 와서 보니 7s ά subunit이 모두 존재하는 걸 볼 수 있었다. 교수님께 말씀드리니 42개의 single seeds를 주셔서 새로 모든 콩들 분석을 다시 해야 한다.... 왼쪽 사진에서 첫 번째 밴드는 size marker, 두 번째랑 마지막은 control인 대원콩, 3,4번째 밴드가 이번에 확인했던 계통이다. 오른쪽 사진은 단백질 함량이 적은 선풍으로 측정을 진행해서 밴드는 얇지만, 두 줄이 있는 거로 보아 확실히 7s ά subunit이 존재함을 알 수 있다.