세계적인 육종학자를 향한 여정

Day 1 1. 선발된 성숙 종자를 막자와 사발을 이용하여 파쇄한다. 이때 정말 곱게 잘 갈아줘야 함 2. 튜브에 번호를 쓰고 시료 200mg을 취한다. 3. 200mg의 시료에 3ml의 Acetone(아세톤)을 첨가한다. 첨가 이유 : 지방질을 제거하기 위함 4. 60°C의 water bath에 두어 2시간 동안 반응시킨다. 5. 2,000 rpm으로 5분간 원심분리하여 침전물만 남기고 용액은 최대한 깔끔히 제거해 준다. 6. 침전물을 약 60°C의 heating block에서 40분-1시간 열처리하여 남은 유기용매(용액)를 완전히 제거한다. 이때 아세톤이 완전히 제거되었는지 꼭 확인해야 함. 아세톤 냄새가 나지 않을 때까지 건조할 것. 7. 건조된 시료에 3차 증류수 1.9ml을 넣고 약 60°C의 ..

[7S a' subunit]10X 정량 단백질 기준 7µl가 적당25.04.16 10µl 넣었는데 교수님이 조금 많다고 하심 다음 논문용 SDS-PAGE 하면,Protein7µlDye5µlddH2O8µl

볼륨은 위 볼륨대로 Protein 넣고  transfer 할 때,1차 antibody는 3% skim milk에 냉동실에서 각각에 맞는 antibody 1 µl 사용2차 antibody는 3% skim milk에 냉장실에서 6.6 µl 사용

이전에 분석을 한 콩들이 모두 7s a' subunit이 존재하여교수님께서 42 single seeds로 다시 분리되는 걸 찾아달라고 하셨다.  단백질의 유무에 따라 단백질이 존재하지 않는것은 나중에 파종을 해야 하기 때문에 Full seed로 추출하면 안되고 발아에 지장이 없도록 자엽부분만 약간 잘라내어 단백질을 추출시킨다.  7s a' subunit은 단백질의 양이 조금 많이 필요하기 때문에 자엽도 최대한 많이 잘라 넣었고, Tris 양도 약간 적게 넣었다. 이번에 사용한 Tris 용량은 80 µl를 사용했고, 원심분리가 끝난 단백질은 40-50 µl를 추출했다. 다음 주 월요일에 SDS-PAGE를 실시할 예정이다. 9,13번 7S a' subunit absence 15번, 16번, 18번, 20번,..

단백질 추출   졸업논문 작성을 위해서 교수님이 단백질 분석을 맡기시고 가셨다. 이번 졸업논문 주제는 7S ά subunit이 제거된 콩 선발이다.  자엽의 색이 녹색인 2가지 계통을 주셔서 Full seed로 단백질 추출을 진행했다. 왼쪽은 control로 대원콩을 사용했다. 대원콩은 자엽의 색깔이 노란색이기 때문에 노란색이다.  7S ά subunit은 SDS-PAGE로 분석하고,단백질양이 많이 필요로 하기 때문에 총 1000 ㎕ (1ml) 추출을 하여 원심분리기를 돌렸다.(사진은 안 찍어둬서 다른 걸로...)  원심분리가 끝나면 0.6ml 마이크로 튜브에 400 ㎕ 정도 뽑아서 정량을 실시했다. SDS-PAGE는 정량이 딱히 필요하지는 않지만, 논문 사진용으로 들어가는 거라혹시 모르니 깔끔한 실험을..

단백질 추출    요즘 수확을 막 끝난 상태라 교수님께서 분석용 콩들을 많이 주신다. 그걸 다 분석을 해야 하는데 모든 실험의 기초가 되는 작업이 1. 단백질 추출 2. 단백질 정량이다. 특히나 이번에 확인해 볼 P34 유전자는 단백질 양이 많이 측정되면 없는 경우에도 있다고 뜰 수가 있어서 실험 전에는 반드시 단백질 정량을 해야 한다.  이번에 교수님께서 주신 콩은 총 26종류였다.  단백질 추출은 총 2가지 방법으로 나뉘는데1. Full seed extraction, 말 그대로 콩 전체를 이용하여 단백질을 추출하는 것이고2. Piece of seed, 종자의 일부분을 잘라내어 추출하는 방식이 있다.  이번에는 Full seeds extraction을 진행했다.Full seed는 콩 전체를 막자사발로 ..

온실 콩 교배 작업  오늘은 온실에 파종한 콩들 교배작업을 실시했다. 콩들의 개화시기가 각각 다르기 때문에 교배 리스트를 보면서 개화기가 맞는 콩들 먼저 교배를 한다.   꽃가루를 사용하는 꽃들을 미리 따와서 부계로 이용될 꽃을 제웅하고 교배를 실시해 준다.  오늘은 교배작업 11개를 완료했다.

PCR (Polymerase Chain Reaction)   교수님이 주신 2024년 포장에서 확인해야 하는 개체들 목록인데 대부분이 rs2(stachyose) 유전자이고, 4개의 개체만 le(lectin)의 유무를 확인하는 작업을 실시했다. 1. PCR 기계에 넣기 전 총 volume 20 µl를 이번에 사용한 건 (DNA 2 µl) (PCR을 시행할 DNA 샘플 개수에 맞춰 증류수, 프라이머 volume을 계산 후 tube에 분주 후 tapping -> DNA는 제외) 2. PCR mixture에 20 µl 씩 분주해 준다. 3. PCR muchine(Bio-RAD)에 1시간 30분 running.  4. PCR muchine 종료 20분 전 아가로스겔(2%)을 제작한다. (큰 판 = 300ml / ..