PCR(Polymerase Chain Reaction)

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PCR (Polymerase Chain Reaction)

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 교수님이 주신 2024년 포장에서 확인해야 하는 개체들 목록인데 대부분이 rs2(stachyose) 유전자이고,

 

4개의 개체만 le(lectin)의 유무를 확인하는 작업을 실시했다.

Rs2유전자 프라이머

 

1. PCR 기계에 넣기 전 총 volume 20 µl를

 

이번에 사용한 건 (DNA 2 µl)

 

(PCR을 시행할 DNA 샘플 개수에 맞춰 증류수, 프라이머 volume을 계산 후 tube에 분주 후 tapping -> DNA는 제외)

 

2. PCR mixture에 20 µl 씩 분주해 준다.

 

3. PCR muchine(Bio-RAD)에 1시간 30분 running.

 

 4. PCR muchine 종료 20분 전 아가로스겔(2%)을 제작한다.

 

(큰 판 = 300ml / 작은 판 = 60ml)

 

5. 전기영동 장치 조립 후 아가로스겔을 붓고 팁으로 기포를 없앤 후 굳힌 다음 comb를 꼽는다.

 

6. 증폭을 마친 DNA 20 µl씩 comb에 로딩 후 running 한다.

(큰 판 기준 1시간 /  작은 판 기준 15분)

 

7. 전기영동을 마친 Gel을 UV 램프로 목적하는 DNA가 발현되는지 유무를 확인한다.

 

이번에 새로 구입한 몇 천만 원짜리 기계로 확인을 했는데 깔끔하게 잘 나왔다.

 

 위 사진이 결과 사진인데, 이번에 챠마메 DNA 분석을 같이 해봤다.

 

동그라미로 표시한 부분이 챠마메인데 결과는 rs2와 lec가 모두 존재했다.