<DNA 증폭> 2. PCR

 

 
 어린 잎을 채취했다면 이제 PCR 과정을 거쳐 DNA 분석을 할 차례. 우선 개요는 이렇다.
 

 
 잎을 냉동시켜  분쇄를 하게 되는데 "액체질소"가 필요해서 본관에 액체질소를 가지러 왔다. 태어나서 처음 다뤄보는 액체질소라 약간 두려움 반, 설레임 반이었는데 끝나고 보니 별거없다. 그래도 좀 신기했다.
 

 
 우선 CTAB 버퍼를 만들어준다.

 
 
 저번에 넣어둔 튜브를 액체질소로 동결시키고 분쇄기로 갈아준다.
 

 
 
 모든 개체들을 다 진행해준다.
 

 
 
 미리 만들어둔 CTAB를 각각의 튜브에 넣어준다.
 

 
 
갯수가 좀 많아서 생각보다 일이 많았다...
 

 
 
 Water bath에 1시간 넣고, 20분마다 꺼내어 잘 섞어준다.

+ 이때 IPA를 500마이크로리터씩 분주하여 냉동실에 넣어놓는다.
 

 
 PCI 용액 500마이크로리터 넣고
 

 
 5분간 Inverting Machine으로 섞어준다.
 

 
 
 원심분리기 4도 12,000rpm에 5분

제일 윗쪽 맑은 부분만 400마이크로리터 추출하여 미리 분주해둔 IPA 500마이크로리터에 넣는다.

원심분리가 끝나면 상층액은 버리고 80% 에탄올 800마이크로리터를 넣는다.

마지막으로 원심분리 후 상층액(에탄올)을 버리고 남아있는 에탄올은 성온에 휘발시킨다.
 

 
 
 그러면 저렇게 층이 생기는데, 저기서 불투명하게 보이는 저 부분만 추출을 해낸다.